Lightsheet熒光顯微技術

Lightsheet的目標與共聚焦一樣，也是進行三維成像。與傳統(tǒng)上的激光掃描共聚焦/轉盤共聚焦、雙光子共聚焦相比，Lightsheet的優(yōu)勢在于很小的光漂白（因為激光掃描共聚焦/轉盤共聚焦都會掃到焦平面外的熒光探針）以及能夠觀察大到1cm的樣品（雙光子共聚焦僅有1mm左右）。而且由于可以直接采用高-分辨率的相機直接對一個焦平面同時成像，所以針對較大樣品的時候速度也比共聚焦的掃描要更快。Lightsheet技術可以實現(xiàn)超大樣品塊、快速掃描、深度成像、高-分辨率、3D動態(tài)圖像輸出，因而受到生命科學研究者，尤其是神經(jīng)發(fā)育顯微成像領域的研究者的歡迎。

Lightsheet技術用途

Lightsheet傳統(tǒng)光學顯微鏡和MRI，CT等成像之間的空隙；在遺傳、發(fā)育等研究中有著較好的應用及前景。因為遺傳發(fā)育學研究者在選擇模式生物（如斑馬魚、果蠅、線蟲等）的時候，透明以利于觀察以及生命周期短是兩個著重考量的因素；透明對于Lightsheet的作用不言而喻，生命周期短的動植物一般也不會長得太大，所以這些模式生物都比較適合于Lightsheet的功能。

Lightsheet技術操作

Lightsheet(光片照明)顯微鏡使用一層光束從樣品側面激發(fā)熒光樣品，通過sCMOS相機來檢測成像，而入射照明光路和sCMOS接收熒光光路互相垂直。通過移動樣品使入射光面激發(fā)不同的平面，且激發(fā)光束從左右兩個方向入射到樣品上，光束的角度可以改變，這樣就可以很容易的得到整個組織的3D圖像，同時保證細胞水平的分辨率。由于樣品受激發(fā)的平面就是成像平面，所以可以將光漂白和光學損傷降低到較低。

Lightsheet技術對成像的要求

Lightsheet對于相機的主要要求是高速、高像素和高靈敏度。高速對應了整套lightsheet所需要的時間分辨率；高像素則對應的是樣品的尺寸，如果像素不夠會導致實際成像分辨率的下降；高靈敏度一個是為了減小曝光時間，另一個則是因為lightsheet所觀察的樣品偏厚，從樣品深處發(fā)出的熒光不可避免地會損失得比較厲害，高靈敏度有利于彌補這個情況。

Lightsheet技術成像產(chǎn)品

基于lightsheet技術對于成像設備分辨率、高速度、高靈敏度的基本要求，sCMOS和速度快一些的EMCCD相機能很好的勝任lightsheet成像的任務。

濱松公司的sCMOS相機Flash 4.0V3非常適合用于lightsheet成像，除此之外，濱松Flash 4.0另提供專門的Lightsheet讀出模式，更是市場上此項應用中相機的。